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凝膠成像系統(tǒng)原理
凝膠成像系統(tǒng)是一種集觀察、拍攝和分析于一體的先進(jìn)儀器,其工作原理主要基于樣品對光的吸收差異或熒光特性,通過光學(xué)和成像技術(shù)將凝膠上的生物分子信息轉(zhuǎn)化為可分析的圖像和數(shù)據(jù)。
凝膠成像系統(tǒng)通常使用熒光成像或透射成像原理進(jìn)行成像。在熒光成像中,樣品中的核酸或蛋白質(zhì)條帶經(jīng)過熒光染色后,在特定波長的激發(fā)光(如藍(lán)光或紫外光)作用下發(fā)出熒光信號。這些熒光信號被攝像機(jī)捕捉并轉(zhuǎn)換為數(shù)字圖像。例如,DNA分子結(jié)合熒光染料后,在藍(lán)光或紫外光激發(fā)下發(fā)出熒光,系統(tǒng)通過鏡頭和濾光片收集并增強(qiáng)熒光信號,最終形成清晰的圖像。
在透射成像中,樣品中的核酸或蛋白質(zhì)條帶通過透射光被攝像機(jī)捕捉成像。光源發(fā)出的光照射樣品,不同樣品對光的吸收量存在差異,導(dǎo)致圖像上樣品條帶的光密度不同。光密度與樣品的濃度或質(zhì)量成線性關(guān)系,通過與已知濃度的樣品條帶光密度進(jìn)行比較,即可得到未知樣品的濃度或質(zhì)量,實(shí)現(xiàn)定量分析。而定性分析則基于樣品在電泳凝膠或其他載體上的遷移率差異,通過與標(biāo)準(zhǔn)品位置的比較確定樣品的成分和性質(zhì)。
凝膠成像系統(tǒng)通常配備專業(yè)的圖像分析軟件,用于對成像數(shù)據(jù)進(jìn)行分析和處理。軟件可以進(jìn)行圖像增強(qiáng)、條帶識別、強(qiáng)度測定、數(shù)據(jù)比對等操作,幫助研究人員準(zhǔn)確分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。例如,通過分子量定量功能,系統(tǒng)可對膠上DNA Marker條帶的已知分子量進(jìn)行注釋,自動生成擬合曲線,衡量得到未知條帶的分子量;密度定量功能則可測定DNA和RNA的濃度,或計(jì)算蛋白表達(dá)產(chǎn)物占整個菌體蛋白的百分含量。
隨著技術(shù)的不斷革新,凝膠成像系統(tǒng)的安全性和易用性大幅提升?,F(xiàn)代儀器采用一鍵式操作,可實(shí)現(xiàn)自動曝光、自動對焦、自動縮放和自動圖像采集與分析,簡化了實(shí)驗(yàn)流程。